Recherche de contaminants : analyse haute sensibilité des cônes Rainin
De nombreux facteurs peuvent nuire aux procédures de biologie moléculaire, mais les contaminants les plus importants sont l’ADN, la DNase et la RNase. Pour s’assurer que les réactions courantes telles que la PCR et la qPCR ne sont pas affectées par ces facteurs, RAININ effectue régulièrement plusieurs tests sur chaque lot de cônes produit.
Matériel et méthode
Pour l’ensemble des tests suivants, un éluat de cône est préparé. 10 cônes de chaque lot sont mis en contact avec 1 000 μL d’eau utilisée en biologie moléculaire. Le volume maximal du cône est aspiré, puis dosé 2 fois pour s’assurer qu’en cas de contamination, cette dernière serait évacuée.
Détection d’ADN : l’acide désoxyribonucléique (ADN) fait partie de la plupart des applications de biologie moléculaire et tout ADN exogène peut modifier considérablemen le résultat expérimental. La PCR quantitative (qPCR) a été appliquée selon la configuration suivante : un système ABI 7700 et le Master Mix Power SYBR Green (ABI) ont été utilisés pour des réactions de 25 μL contenant les contrôles négatifs, différentes concentrations d’ADN (humain ou bactérien) et un éluat de cône. La concentration d’amorce finale est de 250 nM par réaction.
Les jeux d’amorces humaines et bactériennes des séquences conservées suivants ont été utilisés :
Amorces humaines :
Sens : 5’-AAGTGTCAAGGCCAGGAGTTTG
Antisens : 5’-TCCTTCAGCTGGGCTCTCTTAC
Amorces bactériennes :
Sens : 5’-CCAGCAGCCGCGGTAAT
Antisens : 5’-TGCGCTTTACGCCCAGTAAT
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