Détectez efficacement les mycoplasmes dans vos cultures de cellules !
La contamination des cultures de cellules par des mycoplasmes est une préoccupation récurrente des laboratoires. En effet, de par leur nature, ces microorganismes sont très difficiles à détecter et à éliminer :
• Ce sont des parasites cellulaires très fréquents dans la nature (on en trouve sur les animaux, les plante, l'homme)
• Leur taille, plus proche de celle d'un virus que de celle d'une bactérie, fait qu'on ne peut pas les observer au microscope photonique
• L'absence de paroi bactérienne fait que les antibiotiques classiques ne sont pas efficaces pour les éliminer
Les principales sources de contamination sont l'expérimentateur et les cellules elles-mêmes, notamment quand de nouvelles cellules arrivant d'un autre laboratoire sont introduites en salle de culture. C'est pour cette raison qu'il est recommandé d'éviter cette pratique et, quand cela est possible, d'acheter des cellules dans une banque reconnue, comme la banque européenne ECACC. Les banques offrent toutes les garanties en matière de qualité microbiologique de vos cellules. L'ECACC fournit pour chaque cellule acheté un certificat avec les résultats des 3 tests de détection de mycoplasmes réalisés en routine sur toutes les cellules mises en banque.
Les 3 tests de détection des mycoplasmes réalisés par l'ECACC sont :
| 1- Test de croissance en culture : | Ce test consiste à faire pousser en culture les éventuels mycoplasmes qui contaminent une culture. C'est un test microbiologique classique, consistant à réaliser des cultures sur des milieux appropriés pendant 28 jours. Ce test est long et complexe à mettre en place et à interpréter, notamment parce qu'il nécessite la mise en culture d'un témoin positif. Il n'est pas recommandé de le mettre en place comme test de routine dans un laboratoire, mais il est possible de demander à une banque comme l'ECACC de le réaliser si certaines cellules sont précieuses ou nécessaires pour des expériences particulières. A ce jour c'est le seul test reconnu par les organismes de réglementation tels que la FDA. |
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| 2- Test de coloration de l'ADN : | Ce test consiste à « marquer » l'ADN des mycoplasmes grâce à un intercalant pour ensuite le visualiser au microscope en fluorescence. l'ECACC réalise ce test en faisant d'abord une co-culture des cellules à tester avec des cellules de référence de type Vero afin d'amplifier la contamination et d'avoir un beau contraste entre noyaux des cellules (les Vero ont un gros noyau) et les éventuels mycoplasmes à la périphérie des cellules. Sigma propose un kit complet avec le Hoechst, du milieu de montage et des lames contrôle positif et négatif (référence MYC1-1KT). | |
| 3- Test de détection par PCR : | Ce test consiste à amplifier par PCR l'ADN des mycoplasmes de façon spécifique. Le kit développé par Sigma utilise des couples d'amorces dirigées contre la séquence de l'ARN 16S qui est très conservée ce qui permet de détecter la plupart des mycoplasmes couramment rencontrés. Il permet de détecter 19 espèces de mycoplames différentes. | |
La banque ECACC n'utilise pas de tests en luminescence ou en fluorescence car ces tests utilisent le surnagent de culture et non les cellules elles même ; or dans ce cas seules les contaminations massives peuvent être détectées. En effet les mycoplasmes se développent à la surfaces des cellules qu'ils parasitent, et non en suspension dans le milieu.
Retrouvez les protocoles de détection des mycoplasmes de la banque européenne ECACC dans le ECACC handbook, rédigé en collaboration entre la banque et Sigma, revendeur des cellules et services de l'ECACC : commandez ou téléchargez le handbook sur notre site internet.
liste des produits Sigma pour la détection des mycoplasmes.
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