MIQE guidelines : les informations minimum requises pour la publication des résultats d'expériences de PCR quantitative
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La PCR en temps réel et la technique de RT-qPCR sont des méthodes utilisées aujourd'hui dans des domaines aussi variés que la médecine moléculaire, la biotechnologie, la microbiologie, le diagnostic, et sont devenues des méthodes de choix pour la quantification d'acides nucléiques ciblés ou l'identification de variations de séquences. Bien que décrites comme des techniques standard, elles sont loin de représenter des expériences de routine. |
L'utilisation répandue de cette technologie a entraîné le développement de nombreux protocoles présentant des différences significatives dans le traitement de l'échantillon, les contrôles utilisés, les méthodes de normalisation et la gestion du contrôle de qualité, ceci impliquant d'importantes conséquences sur la fiabilité de l'essai, sa pertinence et sa reproductibilité.
Dans une première étape vers la standardisation, une approche globale des techniques de qPCR et RT-qPCR est décrite, illustrant les étapes essentielles requises pour générer des données quantitatives fiables et reproductibles.
Cet article, co-écrit par Tania Nolan, responsable global du service de Design chez Sigma-Aldrich, présente les éléments fondamentaux qui permettent de réduire la variabilité : Contrôle qualité de l'échantillon d'ARN en utilisant des techniques standard, essais SPUD et 3 '/ 5', considérations de la synthèse d'ADNc, optimisation des essais, sélection des contrôles appropriés et analyse des données.
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KiCqStart Primers
Les amorces pré-dessinées Sigma-Aldrich, pour l’analyse de l’expression de vos gènes par RT-qPCR, sont respectueuses des recommandations MIQE : les séquences sont fournies à la livraison et les amorces livrées séparément pour permettre une flexibilité expérimentale optimum.
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