Duolink : une technologie qui révolutionne les techniques de validation des interactions Protéine-Protéine
Duolink ® est une nouvelle technologie simple et rapide qui permet la détection, la visualisation et la quantification des interactions entre les protéines, mais aussi des protéines seules, ou des modifications des protéines dans des échantillons de tissus ou des cellules préparées pour la microscopie. La cible est détectée au moyen d'un ou deux anticorps primaires en fonction de l'application. Dans le cas où deux anticorps primaires sont utilisés, ils doivent avoir été produits dans des espèces différentes.
Cette technique est basée sur le PLA ® in situ, qui est une technologie de ligation de proximité (Proximity Ligation Assay). Elle utilise deux anticorps secondaires couplés chacun à un oligonucléotide et formant les sondes PLA. Le signal n'est généré que lorsque les deux sondes PLA sont fixées à proximité l'une de l'autre, permettant ainsi la ligation et l'amplification à partir des oligonucléotides. Ces sondes PLA reconnaissent soit un seul anticorps primaire soit deux, selon l'expérience, ces anticorps primaires étant eux-mêmes fixés à l'échantillon. Le signal obtenu est une tache fluorescente ou colorée (pour la détection sur coupe de tissus en champ clair) qui apparait en microscopie à l'endroit où la ligation s'est produite. Ces signaux PLA peuvent être quantifiés (comptés) et assignés à une localisation subcellulaire spécifique grâce à l'analyse des images obtenues en microscopie.
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La technologie Duolink est donc particulièrement recommandée pour :
• Visualiser les interactions entre protéines sans avoir à les sur-exprimer;
• Acquérir une spécificité bien supérieure à celle de l'immunofluorescence classique;
• Détecter des évènements rares grâce à l'amplification du signal;
• Analyser avec des instruments classiques d'immunofluorescence.
Pour plus d'information consultez les notes d'application concernant Duolink ou regardez la vidéo.
Duolink ® est une marque enregistrée et développée par la société Olink Bioscience
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