Travailler en toute sécurité dans un laboratoire de culture cellulaire : Conseils pratiques et liens utiles.
L’objectif premier de la prévention au laboratoire est de réduire au maximum les risques liés à l’utilisation de produits dangereux pour le manipulateur mais aussi pour son environnement. Avant toute manipulation, Il est donc primordial :
- D’identifier et d’évaluer les risques inhérents aux expérience
- De travailler dans les conditions tenant compte de ces risques afin de les minimiser au maximum.
Concernant la culture de cellules animales, le risque est dépendant de la lignée cellulaire utilisée. Sa dangerosité éventuelle pour la santé humaine dépend de nombreux facteurs : distance phylogénique, vitesse de division, mode d’immortalisation…
| On peut classer les cellules en trois types : | |||
| Risque faible | • Lignées cellulaires d’origine non humaine / non primate et quelques lignées diploïdes humaines bien caractérisées (par exemple MRC-5). | ||
| Risque modéré | • Lignées cellulaires de mammifères peu caractérisées | ||
| Risque élevé | • Lignées cellulaires dérivées de tissus ou sang humain ou primate • Lignées cellulaires contenant des pathogènes endogènes • Lignées cellulaires utilisées après une infection virale par exemple |
||
Déterminer le niveau de risque :
En général, il est recommandé de travailler en environnement adapté au risque de classe 2 pour des cultures de cellules primaires et par extension pour les cellules d’origine humaine, cependant un L3 peut s’avérer obligatoire comme par exemple lorsque l’on travaille sur des cellules venant de patients contaminés par HIV ou HTLV.
Après repiquage, on peut éventuellement travailler avec une lignée cellulaire avec des mesures de sécurité de la classe de risque 1, si elle a été testée et que l’on démontre qu’elle ne contient aucun agent pathogène pour l’homme ou l’animal. Pour des lignées « classiques », bien caractérisées comme CHO ou HeLa on peut envisager de travailler dans des conditions de risque classe 1 si dans le laboratoire aucun agent pathogène n’est manipulé.
Il est rappelé que le fait de travailler dans un L2 ou L3 ne garantit pas une sécurité totale et qu’il est indispensable de respecter les consignes de sécurité associées :
- Agencement du laboratoire
- Equipements et matériels adéquats
- Bonnes pratiques de laboratoire
Description des confinements : http://www.cnrs.fr/infoslabos/reglementation/CGGrecommand.htm
Bien désinfecter
Les produits pour désinfecter et décontaminer les surfaces de travail et le matériel utilisé sont divers :
| Solutions hypochlorites (Chlore…) | |||
| o Bons désinfectants o Actives contre les virus o Corrosives (ne pas les utiliser sur des surfaces métalliques, attention en particulier aux hottes) o A utiliser le jour de fabrication o A utiliser à 1000 ppm pour une désinfection des surfaces, à 2 500 ppm pour le nettoyage des pipettes, et 10 000 ppm pour le matériel en contact avec les déchets et les pollutions accidentelles. |
|||
| Attention à enlever toutes les substances hypochlorites lorsque vous utilisez des formaldéhydes, quand les deux produits réagissent ensemble, ils produisent des substances carcinogènes. | |||
| Les alcools (éthanol, isopropanol) | |||
| o Efficaces contre les bactéries. o L’éthanol est efficace contre la plupart des virus non enveloppés o L’isopropanol n’est pas efficace contre les virus o Les utiliser à 70% pour l’éthanol, 60-70% pour l’isopropanol |
|||
| Les Aldéhydes (ex. glutaraldehyde, formaldehyde) | |||
| o Les aldéhydes sont irritants, il faut donc en limiter l’usage si possible o La glutaraldehyde peut être utilisée quand il n’est pas possible d’utiliser des solutions chlorées (cuves de centrifugation, ou matériel métallique sensible à la corrosion) |
|||
Elimination des déchets
- Milieux : Inactivation dans une solution chlorée (10 000 ppm), une nuit, avant leur élimination dans un excès d’eau.
- Pipettes : Les pipettes contaminées doivent être plongées dans une solution chlorée (2500ppm), une nuit, avant de les éliminer par autoclavage et incinération.
- Déchets solides (flasques, tubes à centrifuger, gants contaminés, tissus etc) : devraient être placés dans des sacs appropriés et autoclavés avant incinération.
informations complémentaires
Protocoles et techniques fondamentales en culture cellulaire
Informations du CNRS concernant les mesures de sécurité
Site de la commission de génie génétique
 |
Demande d'information |
