shRNA sous contrôle de systèmes inductibles

Chez E. coli, les gènes impliqués dans un processus métabolique sont souvent organisés en unité de transcription appelée « opéron ». Dans l’opéron lactose, on trouve :

 

• des gènes structuraux codant pour des enzymes impliquées dans le métabolisme du lactose;
• une région régulatrice qui comprend le promoteur et l’opérateur LacO.
• le gène régulateur LacI qui code pour un répresseur qui se lie sur l’ADN au niveau de l’opérateur et inhibe l'expression des gènes structuraux;
• en présence de lactose, le répresseur se détache de l’opérateur, suite à un changement allostérique: l'ARN polymérase peut alors se fixer sur le promoteur.

 

Les shRNA inductibles développés par Sigma Aldrich sont dérivés du vecteur pLKO :

 

• la synthèse des shRNA est sous le contrôle du promoteur U6 et de l’opérateur Lac;
• ils contiennent le gène régulateur LacI qui code pour un répresseur;
• en l’absence d’IPTG (analogue du lactose) : le répresseur se lie à LacO et prévient l’expression du shRNA;
• en présence d’IPTG, le répresseur se détache de l’opérateur, permettant l’expression du shRNA.

  

Sigma-Aldrich vous propose deux types de vecteurs :

- pLKO_IPTG_1xLacO, avec une séquence LacO : on observe une meilleure expression du shRNA en présence d’IPTG mais aussi un niveau d’expression basal plus fort

- pLKO_IPTG_3xLacO, avec trois séquences LacO : ce vecteur permet à la fois un très bon niveau d’induction et une régulation plus stricte de l’expression.

   

Ces vecteurs fonctionnent in vivo et in vitro et permettent d’étudier l’extinction de gènes en particulier les gènes létaux ou essentiels à la survie de la cellule.

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