Modulation du génome
Sigma Aldrich
Et maintenant le système CRISPR Cas9-D10A Nickase !
La protéine CRISPR Cas9-D10A Nickase a été développée en vue de diminuer les effets non spécifiques observés avec la CRISPR Cas9. Ceux-ci sont principalement dus à la fixation des ARN guides sur des séquences génomiques non cibles. Ces dernières sont similaires à la séquence cible choisie mais présentent une à 5 bases différentes.
La protéine CRISPR Cas9-D10A Nickase contient une substitution d’acide aminé (D10A) qui lui confère la propriété de ne plus couper qu’un seul brin d’ADN génomique. Deux ARN guides deviennent donc nécessaires pour couper chacun des brins de l’ADN génomique :
- Tout comme avec les ZFNs, deux évènements de liaison indépendants deviennent nécessaires pour couper chacun des deux brins de l’ADN génomique. Cela diminue la probabilité des effets « off-target » puisque la probabilité d’avoir deux attachements non spécifiques situés à la bonne distance l’un de l’autre est très faible.
- La longueur de la séquence cible des CRISPRs est multipliée par deux et passe à 38 bases (2X19), ce qui veut dire que le pourcentage de chance de travailler avec une séquence unique est augmenté de manière significative et devient similaire à celui des ZFN ou des TALEN.
Pourquoi utiliser le système CRISPR-Cas9 ?
- C’est la technologie d’édition du génome ciblée la moins onéreuse du marché et la plus facile à mettre en place.
- Le multiplexage est possible : plusieurs publications démontrent que l’on peut éteindre plusieurs gènes en une seule expérience.
- Les expériences de criblage haut débit sont envisageables puisqu’il est possible de construire des banques de vecteurs CRISPR.
- Limite : le système CRISPR-Cas9 peut présenter des effets non spécifiques. Il est toutefois relativement facile de contrôler l’absence d’effets « off-target » en séquençant les régions homologues de la séquence cible.
- Les tarifs restent accessibles.
- Les effets off-target sont réduits de manière très significative.
- Limite : le design est moins flexible et la technologie est moins facile à mettre en place.
Sigma Aldrich propose les CRISPR Cas9 et les CRISPR Cas9-D10A nickase en formats ARN prêts à l’emploi, compatibles avec la microinjection ou la transfection de cellules pour :
- La création de modèles animaux transgéniques.
- Eviter toute intégration aléatoire des plasmides exprimant les composants du système, mais il est à noter que ce risque est très faible (un évènement pour 104 à 105 cellules).
- Ne plus avoir besoin de promoteur spécifique, l’expression pouvant se faire directement dans le cytoplasme de la plupart des cellules ou organismes.
- Le contrôle qualité des lots d’ARNm exprimant la Cas9 et la Cas9-D10A (nickase) inclut un test de fonctionnalité (mesure de l’activité Cel1)
- Nos équipes de R&D et de production et notre équipe de design ont un savoir-faire unique dans le domaine de la régulation et de la modification du génome.
- La commande est très simple grâce à notre moteur de recherche interactif
- Nos CRISPRs répondent à la qualité de production et de service Sigma Aldrich
Gamme CRISPR Cas9 et CRISPR Cas9-D10A Nickase Sigma Aldrich
- Les plasmides CRISPR Cas9 tout-en-un avec expression de l’ARN guide et de la protéine Cas9 couplée à la GFP ou à la RFP à partir d’un seul vecteur.
- Le système CRISPR Cas9 double vecteurs avec la Cas9 and l’ARN guide exprimés à partir de deux plasmides différents, très pratique pour produire les ARN correspondants. Nous les proposons en :
- Formats plasmidiques
- Formats ARN : ARNm Cas9 (#CAS9MRNA) et un ARN guide en format ARN
- Le système CRISPR Cas9 nickase avec la Cas9-D10A nickase et les deux ARN guide exprimés à partir de deux plasmides différents
- Formats plasmidiques : CRISPR Cas9-D10A Nickase Plasmid: #CAS9D10AP + une paire de plasmides (U6gRNA)
- Formats ARN Cas9-D10A (nickase) mRNA #CAS9D10AMRNA + une paire d’ARN correspondant à la paire U6-gRNA.
- Les Contrôles positifs CRISPR :
- “EMX1 positive controls for single gRNAs” (CRISPR01-1SET)
- “EMX1 positive controls for CRISPR paired nickases” (CRISPR02-1SET)
- CRISPR Universal negative controls 1, 2 or 3
Plus d’informations sur sigma.com/CRISPR
Protocole CRISPR :
http://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/1/crisprbul.pdf
Protocole ZFN (contient des données utilisables avec les CRISPR) : http://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/1/ckozfndbul.pdf
